Matilda: En vakker ung kvinne som er gjenstand for Ambrosios ønske. Hun blir til slutt drept av Ambrosio etter at hun avviste ham.
Agnes: En ung nonne som er Ambrosios elev. Hun blir forført av Ambrosio og blir gravid. Hun dør til slutt av fødsel.
Don Raymond: Abbeden til klosteret der Ambrosio bor. Han er en klok og rettferdig mann som prøver å hjelpe Ambrosio med å overvinne fristelsene sine.
Donna Elvira: En velstående og mektig kvinne som blir Ambrosios elsker. Hun forråder ham til slutt og overgir ham til inkvisisjonen.
Inkvisitoren: En mektig og hensynsløs mann som leder Ambrosios rettssak og til slutt dømmer ham til døden.