* Antagelsen om at alle karakterer er heterofile. Dette er tydelig i måten karakterene snakker om kjærlighet og relasjoner, og i måten de samhandler med hverandre. For eksempel, når Viola forkler seg som mann, antas hun umiddelbart å være forelsket i Orsino, selv om hun aldri har møtt ham.
* Fremstillingen av ønske om samme kjønn som unaturlig eller komisk. Dette er tydeligst sett i karakteren til Sir Andrew Aguecheek, som stadig gjør vitser om hans tiltrekning til menn. Hans ønske blir ikke tatt på alvor av noen, og han blir ofte latterliggjort for det.
* Det faktum at stykket avsluttes med et tradisjonelt heteroseksuelt ekteskap. Dette forsterker ideen om at heteroseksualitet er den eneste akseptable formen for seksuell legning.
Uttrykket av heteronormativitet i Twelfth Night er problematisk fordi det marginaliserer og ekskluderer ikke-heteroseksuelle mennesker. Det skaper også et klima der det er vanskelig for ikke-heteroseksuelle mennesker å være åpne om sin seksuelle legning.