Linjen "Sov ikke mer!" har flere lag av betydning i stykket. På ett nivå er det ganske enkelt Macbeths befaling til hele husstanden å holde seg våken og være på vakt, da han frykter at noe har gått galt. Linjen har imidlertid også dypere betydninger og varsler om hendelsene som kommer.
For det første linjen "Sov ikke mer!" kan sees på som en metafor for tapet av uskyld og begynnelsen på Macbeths nedstigning i mørket. Frem til dette tidspunktet i stykket har Macbeth slitt med samvittigheten og vist anger for handlingene sine. Men ved å si linjen "Sov ikke mer!", forviser han effektivt søvnen og dermed enhver sjanse for forløsning. Denne linjen markerer et vendepunkt i Macbeths karakter og symboliserer hans omfavnelse av det onde.
For det andre, linjen "Sov ikke mer!" er en kraftig forbannelse som Macbeth kaster over seg selv og hele husstanden. Ved å nekte seg selv og de andre muligheten til å sove, skaper Macbeth en tilstand av evig uro og angst. Søvn er ofte forbundet med fred, restaurering og det underbevisste sinnet, og ved å frata seg selv det, setter Macbeth scenen for den mentale og følelsesmessige uroen som vil følge. Uttrykket antyder dermed at det ikke vil være noen pusterom fra skyldfølelsen, frykten og paranoiaen som Macbeth opplever.
For det tredje, linjen "Sov ikke mer!" foreskygger den urovekkende søvngjengerepisoden som Lady Macbeth vil oppleve senere i stykket. Etter hvert som Macbeth blir stadig mer oppslukt av skyldfølelsen, begynner Lady Macbeth å lide av søvngjengeri og mareritt, hvor hun stadig gjentar setningen "Ut, forbannet sted!" (Akt 5, Scene 1). Denne linjen gjenspeiler på en måte Macbeths tidligere kommando, og understreker søvnløsheten og den mentale angsten som har rammet paret.
Som konklusjon, linjen "Sov ikke mer!" er et avgjørende øyeblikk i Macbeth som signaliserer Macbeths transformasjon til et hensynsløst og skyldfølt individ. Den fungerer som en metafor for tapet av uskyld, en kraftig forbannelse og en varsel om fremtidige ulykker som venter Macbeth og de rundt ham.