I løpet av sommeren 1928 så Ub Iwerks, en av animatørene som jobbet ved Disney Brothers Studio i Los Angels en mus som tuslet rundt i studioet. Selskapet hadde nettopp mistet rettighetene til Oswald the Lucky Rabbit deres suksessrike tegneseriestjerne. Walt Disney var i kontoret hans tegnet skisser for en ny karakter, da han husket å ha sett musen. Han tegnet en grov skisse av en gnager.
Mikke Mus er født
Ub Iwersk brukte Disneys skisse til å lage flere tegninger av karakteren. Disney likte designene og kalte musen Mikke Mus. Iwerks og Disney samarbeidet om å lage den første Mikke Mus-tegneserien, "Steamboat Willie". Tegneserien ble en stor suksess og Mikke Mus ble raskt en av de mest populære karakterene i verden.
Inspirasjon fra Charlie Chaplin
Walt Disney ble også inspirert av stumfilmkomikeren Charlie Chaplin da han skapte Mikke Mus. Chaplins karakteristiske bart, derbyhatt og baggy bukser ble alle integrert i Mickeys design. Disney beundret også Chaplins evne til å formidle følelser uten å bruke ord, og han ville ha Mikke Mus for å ha samme evne.