Kirby-Bauer-teknikken er en standard mikrobiologisk metode som brukes til å bestemme følsomheten til bakterier for antimikrobielle midler. Det innebærer å måle sonen for inhibering av bakterievekst rundt antibiotika-impregnerte skiver plassert på en agarplate inokulert med testorganismen. Her er de generelle trinnene for Kirby-Bauer-teknikken:
1. Fremstilling av inokulum :
- En ren kultur av testbakteriesammen oppnås og dyrkes i et egnet buljongkulturmedium for å oppnå logaritmisk vekstfase (turbiditet).
- Bakteriesuspensjonen er standardisert til en spesifikk turbiditet, typisk tilsvarende en 0,5 McFarland turbiditetsstandard, for å sikre en konsistent inokulumtetthet.
2. Inokulering av agarplate :
- Sterile agarplater som inneholder Mueller-Hinton-agar eller et annet passende agarmedium brukes til testen.
- Ved hjelp av en steril bomullspinne spres det standardiserte inokulumet jevnt over overflaten av agarplaten for å skape en sammenflytende plen med bakterievekst.
- Den inokulerte platen får tørke i noen minutter for å absorbere overflødig fuktighet.
3. Bruk av antibiotikadisker :
- Sterile antibiotikadisker som inneholder spesifikke konsentrasjoner av antimikrobielle midler, plasseres på overflaten av agarplaten med jevne mellomrom ved bruk av steril pinsett eller en diskdispenser.
- Skivene presses forsiktig for å sikre god kontakt med agaroverflaten uten å skade skivene.
4. Inkubasjon :
- Den inokulerte platen med antibiotikaskiver inkuberes ved en passende temperatur (vanligvis 35-37°C) i en spesifisert periode (vanligvis 16-24 timer) for å tillate bakterievekst og diffusjon av antimikrobielle midler.
5. Måling av inhiberingssoner :
- Etter inkubasjon undersøkes platene for tilstedeværelse av hemmingssoner rundt antibiotikaskivene.
- Ved hjelp av en linjal eller en digital skyvelære måles diameteren til hver hemningssone i millimeter.
- Sonediameteren indikerer følsomheten til testorganismen for det spesifikke antibiotikumet.
6. Tolkning av resultater :
- De målte sonediametrene sammenlignes med standardiserte tabeller eller retningslinjer, slik som de levert av Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), for å bestemme testorganismens mottakelighet eller resistens overfor de testede antimikrobielle midlene.
- Organismer er kategorisert som mottakelige, middels eller resistente basert på størrelsen på hemmingssonene og etablerte tolkningskriterier.
7. Kvalitetskontroll :
- For å sikre nøyaktigheten og påliteligheten til Kirby-Bauer-teknikken, er kvalitetskontrollstammer med kjente følsomhetsmønstre inkludert i hver batch med testing for å overvåke ytelsen til metoden og reagensene som brukes.
Det er viktig å følge standardiserte prosedyrer og tolke resultater i henhold til etablerte retningslinjer for å få pålitelig og klinisk relevant informasjon fra Kirby-Bauers antibiotikaresistenstesting.