Heksene blir først introdusert i 1. akt, scene 3, når de møter Macbeth og Banquo på heia. De hilser Macbeth med tre profetier:at han vil bli Thane av Cawdor, Thane av Glamis og konge av Skottland. Banquo får også tre profetier, men de er ikke like spesifikke. Heksenes profetier planter frø av ambisjon i Macbeths sinn, og han begynner å planlegge for å oppfylle dem.
Heksene dukker opp igjen i 3. akt, scene 5, når Macbeth besøker dem i hulen deres. De viser ham en rekke visjoner, som representerer hans fremtid og konsekvensene av hans handlinger. Heksene forteller også Macbeth at han vil bli beseiret av "Birnam Wood" og "en mann som ikke er født av kvinne." Disse profetiene får Macbeth til å tro at han er uovervinnelig, og han blir enda mer hensynsløs i jakten på makt.
Heksene spiller en avgjørende rolle i Macbeths fall. De setter i gang hendelsene som fører til hans ødeleggelse, og de gir ham den falske følelsen av trygghet som til slutt fører til hans nederlag. Heksene er en mektig og farlig kraft, og de representerer den mørke siden av menneskets natur.
I tillegg til å skape en følelse av mystikk og spenning, tjener heksene også til å kommentere temaene i stykket. De representerer de overnaturlige kreftene som kan påvirke menneskelig atferd, og de viser hvor lett mennesker kan bli korrumpert av ambisjoner og makt. Heksene er en advarsel til publikum om at ukontrollerte ambisjoner kan føre til tragiske konsekvenser.