I stykket Macbeth spiller Lady Macbeth en avgjørende rolle i kong Duncans død. Det er hun som overbeviser Macbeth om å myrde kongen, og hun hjelper ham med å planlegge og gjennomføre gjerningen.
Etter at Macbeth har uttrykt tvilen og frykten for å drepe kongen, bespotter Lady Macbeth ham for å være en feiging og skammer ham til å begå forbrytelsen. Hun påpeker at han allerede har hatt ideen om å drepe Duncan og at han bare nøler på grunn av sin "svake natur". Hun minner ham også om ambisjonen hans om å bli konge og forteller ham at han må være hensynsløs hvis han vil nå målene sine.
Lady Macbeths besluttsomhet og manipulasjon overbeviser til slutt Macbeth om å gå med på planen hennes. Hun legger ut detaljene rundt drapet, inkludert hvordan og når det skal gjøres. Hun ber også Macbeth om å forlate de blodige dolkene ved Duncans kropp slik at skylden vil falle på kongens vakter.
Etter at drapet er begått, er Lady Macbeth i utgangspunktet sikker på at de vil være i stand til å dekke det opp. Imidlertid begynner hun snart å vise tegn på skyld og galskap. Hun blir besatt av blodet på hendene og får ikke sove. Hun begynner også å få visjoner om spøkelset til Duncan, som anklager henne for drap.
Lady Macbeths skyldfølelse blir til slutt for mye for henne å bære. Hun dør i stykkets fjerde akt, og hennes død er et vendepunkt for Macbeth. Han blir enda mer hensynsløs og tyrannisk, og til slutt mister han vettet.
Lady Macbeths rolle i kong Duncans død er viktig fordi den fremhever ambisjonens kraft og farene ved å la ens ønsker overvinne deres moralske prinsipper. Hun er en kompleks og tragisk karakter som til slutt blir ødelagt av sin egen ambisjon og skyld.