- Horatio Caines kone, Marina, spilt av Sofia Milos: Marina Caim var Horatios kone under de første sesongene av showet. Hun var opprinnelig en privatetterforsker som hjalp Horatio i noen saker. Imidlertid falt ekteskapet deres til slutt fra hverandre på grunn av Horatios dedikasjon til arbeidet hans.
- Calleigh Duquesne, spilt av Emily Procter: Calleigh Duquesne er en CSI nivå 3 og datter av en politimann i Miami. Hun er en dyktig rettsmedisiner og er kjent for sin ekspertise innen DNA-analyse og skytevåpenidentifikasjon.
- Natalia Boa Vista, spilt av Eva LaRue: Natalia Boa Vista blir med på laget i sesong 5 som CSI nivå 2. Hun er en tidligere undercover politimann og har bakgrunn fra psykologi, noe som hjelper henne å forstå motivasjonen til kriminelle.
- Delkos kone, Marisol Delko, spilt av Elizabeth Berkley Lauren: Marisol Delko er kona til Eric Delko. De gifter seg i sesongfinalen av sesong 4. Marisol jobber også som drapsdetektiv i Miami.
- Yelina Salas, spilt av Sofia Vassilieva: Yelina Salas blir med på laget i sesong 9. Hun er datter av en russisk gangster og har kunnskap om hvordan kriminelle organisasjoner fungerer.