På sin reise blir Despereaux venn med en klok rotte som heter Chiaroscuro, en menneskelig tjener som heter Miggery Sow, og en blind jente som heter Antonia. Chiaroscuro hjelper Despereaux å forstå hans sanne hensikt og oppmuntrer ham til å være modig. Miggery Sow hjelper Despereaux med å navigere i menneskeverdenen og gir ham verdifulle råd. Antonia, som har en sterk forbindelse med dyr, blir en nær venn av Despereaux og støtter ham i hans søken.
Sammen legger Despereaux, Chiaroscuro, Miggery og Antonia ut på et farlig eventyr for å redde prinsessen og bringe fred mellom mus og rotter. Underveis møter de mange utfordringer og hindringer, men deres besluttsomhet og lojalitet hjelper dem å overvinne enhver motgang.
"The Tale of Despereaux" er en hjertevarm og inspirerende historie om vennskap, tapperhet og å akseptere ens sanne identitet. Det understreker viktigheten av å være annerledes, siden det ofte er våre unike egenskaper som gjør oss spesielle og i stand til store ting.