- Elizabeth Shaw: En ung vitenskapsmann som er en del av mannskapet på romskipet Prometheus. Hun drives av sin tro til å finne ingeniørene, skaperne av menneskeheten.
- David: En android som også er medlem av Prometheus-mannskapet. Han er svært intelligent og nysgjerrig, men også hensynsløs og kalkulerende.
- Weyland: Administrerende direktør i Weyland Corp., selskapet som finansierte Prometheus-ekspedisjonen. Han er besatt av å finne ingeniørene og få udødelighet.
- Meredith Vickers: Weyland Corp.-representanten på Prometheus. Hun er en hensynsløs og ambisiøs forretningskvinne som er villig til å gjøre alt for å nå sine mål.
- Janek: Kapteinen på Prometheus. Han er en veteranastronaut som prøver å holde mannskapet sitt trygt samtidig som han oppfyller oppdragets mål.
- Holloway: En biolog på Prometheus som er Shaws romantiske partner. Han er fascinert av ingeniørene og deres kreasjoner.
- Fifield: En geolog på Prometheus som er ivrig etter å utforske den fremmede månen. Han er hensynsløs og impulsiv, og setter ofte seg selv og besetningskameratene i fare.