I utgangspunktet var Mikke Mus preget av sin enkle, avrundede figur og store øyne. Iwerks brakte betydelig raffinement til Mickeys design, og introduserte subtile endringer som forbedret hans personlighet og uttrykksevne. Han fremhevet Mikkes ører og la til svarte sirkler i øynene, noe som ga karakteren et mer særegent og kjærlig utseende.
Iwerks spilte også en sentral rolle i utviklingen av de tidlige Mikke Mus-animasjonene. Han var banebrytende for innovative teknikker som "rett frem" og "pose-to-pose" animasjon, som muliggjorde større flytende bevegelser og en mer dynamisk skildring av karakteren. Hans banebrytende bidrag bidro til å etablere Mikke Mus som et elsket ikon og et verdensomspennende kulturfenomen.