En polyakrylamidgelen er utarbeidet med sporene i den. Gelen dannes ved å helle en varm væske polyakrylamid -løsning i en grunn boks . Boksen bør inneholde en comblike struktur med tenner som peker ned i løsningen. Den polyakrylamid blir en gel straks etter at den er strømmet , og kammen er fjernet for å avdekke rektangulære hull .
Natrium -dodecyl-sulfat (SDS )
Proteinet ble behandlet med natriumdodecylsulfat (SDS ) for å denaturere de subenheter av et stort protein , så hver av dem kan måles separat. Fordelene til dette er at den gir SDS polypeptidene en negativ ladning , slik at de vil migrere mot den negative ende , eller anoden , av gelen . For det andre gjør SDS at alle underenhetene vil ha samme kostnad , og derfor vil alle migrere i gel i henhold til deres molekylære massene i stedet for kostnader.
Tilsetting av protein
En liten mengde DNA eller protein er plassert i en av de rektangulære hull i den ene enden av gelen . En elektrisk strøm blir drevet gjennom gelen ved nøytral pH. Ca 10 mikro-liter av en DNA- stige samt to kontroller blir også lastet inn i gelen . DNA stigen brukes til å tillate måling av hvor langt prøven flyttet i ferd med elektroforese.
Elektroforese
Maskinen er deretter slått på til 100 volt og la kjøres i 30 minutter . Etter at prøvene er blitt elektroforese i 30 minutter , blir gelen sammen med et brett fjernet og plassert i en fargings skuffen i ca tre minutter . Dette blir så fulgt ved å plassere gelen i varmt vann i fem minutter . Gelen er nå klar til å bli plassert på lyskasse for å observere bevegelsen av DNA-fragmenter .
Andre hensyn
Når du ser på gel under lyset , bør noen viktige ting tas i betraktning . En celle kan enten være heterozygot eller homozygot for genet avhengig av om kopien er til stede eller ikke til stede i begge kopier eller i bare en . Den heterozygot Resultatet kan vises som et enkelt bånd , fordi de segmenter av DNA som blir forsterket mer effektivt mørkere i gelen . Et fargestoff er også lagt slik at hvert polypeptid kan sees både under og etter elektroforese.